原核蛋白表達及功能分析

簡(jiǎn)

蛋白是生命活動(dòng)的體現者,因此,只有獲取具有正確構象和功能的重組蛋白才能進(jìn)行后續的生命科學(xué)研究。

采用大腸桿菌E.coli表達體系是獲取重組蛋白最重要的手段之一,該方法具有操作方便、成本低,而且重組蛋白含量較高等優(yōu)點(diǎn)。獲取的該蛋白適用于抗體制備、功能分析、細胞實(shí)驗以及蛋白相互作用研究等優(yōu)點(diǎn)。當然,該方法獲取的重組蛋白容易形成包涵體、需要復性以及缺乏蛋白后續修飾等缺點(diǎn)。

 

基本流程

技術(shù)優(yōu)勢

(1)       本公司擁有多種原核表達載體系統,pET系統(pET21、pET28、pET32以及pET41等)(含6×HIS Tag);pGEX系統(pGEX-4T-1pGEX-4T-1)(含GST Tag);以及改良過(guò)的pCold冷休克的表達體系,根據實(shí)際需要選擇合適的載體,這對于減少包涵體的形成,提高重組蛋白的可溶性非常關(guān)鍵。

(2)       本公司擁有至少7種原核表達宿主菌,常規的E.coli BL21DE3)、Rosetta、Origami、Arctic Express等,有些宿主菌非常有效的適用于超低溫環(huán)境下原核蛋白的穩定和可溶性表達,這對于蛋白功能研究非常關(guān)鍵。

客戶(hù)須知:

原核蛋白表達及功能分析

 

周期

最終提供客戶(hù)資料

原核蛋白表達及功能分析

 

20-30個(gè)工作日,視樣品和基因數目而定。

詳細實(shí)驗總結報告(包括CDS克隆、載體構建、測序、總蛋白分析、Western blot鑒定、表達部位分析、純化等)。

 

 

 

 

案例

本實(shí)驗在對某昆蟲(chóng)中分子伴侶基因進(jìn)行原核表達,采用pET32表達系統,同時(shí)采用低溫(13℃)環(huán)境下進(jìn)行該基因的誘導表達,獲取更多的可溶性蛋白,同時(shí)進(jìn)行純化和蛋白功能 

分析,部分結果如下:

 

            鞭毛蛋白與TLR5胞外區相互作用的PAGE檢測

 

 

客戶(hù)提供:

樣品類(lèi)型

常見(jiàn)物種(Rat、MouseHuman

其他物種

樣品需要量

 

 

取樣和保存環(huán)境

只需提供NCBI基因序列號

提供組織、細胞以及準確的CDS序列。

 

運輸

杭州市內干冰上門(mén)取樣;

外地客戶(hù)干冰快遞運輸;

組織保存液,冰袋運輸

杭州市內干冰上門(mén)取樣;

外地客戶(hù)干冰快遞運輸;

 

*(經(jīng)本公司評估后,實(shí)驗沒(méi)有結果,不收取任何費用)

 


 

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