蛋白是生命活動(dòng)的體現者,因此,只有獲取具有正確構象和功能的重組蛋白才能進(jìn)行后續的生命科學(xué)研究。
采用大腸桿菌E.coli表達體系是獲取重組蛋白最重要的手段之一,該方法具有操作方便、成本低,而且重組蛋白含量較高等優(yōu)點(diǎn)。獲取的該蛋白適用于抗體制備、功能分析、細胞實(shí)驗以及蛋白相互作用研究等優(yōu)點(diǎn)。當然,該方法獲取的重組蛋白容易形成包涵體、需要復性以及缺乏蛋白后續修飾等缺點(diǎn)。
基本流程
技術(shù)優(yōu)勢
本公司擁有多種原核表達載體系統,pET系統(pET21、pET28、pET32以及pET41等)(含6×HIS Tag);pGEX系統(pGEX-4T-1和pGEX-4T-1)(含GST Tag);以及改良過(guò)的pCold冷休克的表達體系,根據實(shí)際需要選擇合適的載體,這對于減少包涵體的形成,提高重組蛋白的可溶性非常關(guān)鍵。
本公司擁有至少7種原核表達宿主菌,常規的E.coli BL21(DE3)、Rosetta、Origami、Arctic Express等,有些宿主菌非常有效的適用于超低溫環(huán)境下原核蛋白的穩定和可溶性表達,這對于蛋白功能研究非常關(guān)鍵。
客戶(hù)須知:
原核蛋白表達及功能分析
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周期 |
最終提供客戶(hù)資料 |
原核蛋白表達及功能分析
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20-30個(gè)工作日,視樣品和基因數目而定。 |
詳細實(shí)驗總結報告(包括CDS克隆、載體構建、測序、總蛋白分析、Western blot鑒定、表達部位分析、純化等)。
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案例:
本實(shí)驗在對某昆蟲(chóng)中分子伴侶基因進(jìn)行原核表達,采用pET32表達系統,同時(shí)采用低溫(13℃)環(huán)境下進(jìn)行該基因的誘導表達,獲取更多的可溶性蛋白,同時(shí)進(jìn)行純化和蛋白功能
分析,部分結果如下:
鞭毛蛋白與TLR5胞外區相互作用的PAGE檢測
客戶(hù)提供:
樣品類(lèi)型 |
常見(jiàn)物種(Rat、Mouse和Human) |
其他物種 |
樣品需要量 |
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取樣和保存環(huán)境 |
只需提供NCBI基因序列號 |
提供組織、細胞以及準確的CDS序列。
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運輸 |
杭州市內干冰上門(mén)取樣; 外地客戶(hù)干冰快遞運輸; 組織保存液,冰袋運輸 |
杭州市內干冰上門(mén)取樣; 外地客戶(hù)干冰快遞運輸;
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*(經(jīng)本公司評估后,實(shí)驗沒(méi)有結果,不收取任何費用)